I. INTRODUCTION
- Les antigènes de groupes sanguins sont définis par la capacité d’un individu à produire des anticorps dirigés contre des structures de la membrane des globules rouges qu’il n’exprime pas.
- La réaction antigène–anticorps constitue la base des techniques en immuno-hématologie.
II. RAPPEL GÉNÉRAL SUR LES RÉACTIONS D’AGGLUTINATION
1. Principe
- Réaction mettant en jeu un antigène de surface des hématies.
- Les anticorps se fixent aux antigènes et forment des ponts spécifiques, aboutissant à des amas visibles (agglutinats).
2. Paramètres de la réaction
Anticorps
- Agglutinants : principalement IgM, capables d’agglutiner en milieu salin.
- Non-agglutinants : incapables d’agglutiner sans artifice.
Antigènes
- L’agglutinabilité dépend :
- du nombre de sites antigéniques,
- de leur densité,
- de leur localisation membranaire.
3. Facteurs expérimentaux
- Température : réaction plus rapide à 37 °C.
- pH : optimum entre 6 et 8.
- Force ionique : influence la formation du réseau Ag–Ac.
4. Types de réactions d’agglutination
| Type | Principe | Application |
|---|---|---|
| Agglutination active | Interaction directe Ag–Ac (IgM) | Groupage ABO |
| Agglutination indirecte | Nécessite un artifice (Ac non agglutinants) | Phénotypage Rh |
5. Techniques générales
- Ajout de macromolécules facilitant le rapprochement cellulaire.
- Hydrolyse enzymatique des glycoprotéines membranaires.
- Utilisation d’anticorps anti-anticorps.
- Techniques automatisées / semi-automatisées :
- Prélèvement et mélange automatiques GR / sérum.
- Incubation, centrifugation.
- Lecture par spectrophotométrie ou analyse d’images.
III. APPLICATIONS
1. Groupage ABO
Principe général
- Deux épreuves d’agglutination active directe réalisées simultanément (IgM).
| Épreuve | Principe | Objectif |
|---|---|---|
| Beth-Vincent (globulaire) | GR du patient + antisérums connus | Identifier les antigènes |
| Simonin (sérique) | Sérum du patient + GR tests connus | Identifier les anticorps |
Règles
- Réalisé :
- deux fois,
- par deux manipulateurs différents,
- avec deux lots de réactifs différents.
- Concordance obligatoire entre épreuves globulaire et sérique.
- Séparation plasma / culot globulaire par centrifugation.
Techniques
- Plaque d’opaline.
- Tube à hémolyse.
- Microplaque (manuelle ou automatisée) :
- Micropuits sensibilisés,
- Utilisation d’enzymes (broméline),
- Matériel à usage unique,
- Compatible avec l’automatisation.
- Technique en gel :
- GR non sensibilisés → sédimentent au fond.
- Agglutination forte → GR retenus en haut du gel.
- Agglutination faible → GR dispersés dans le gel.
2. Groupage Rhésus (D)
Principe
- Mise en contact des hématies avec un sérum anti-D.
- Agglutination → Rh positif.
Règles
- Deux déterminations à partir de deux prélèvements distincts.
- Utilisation d’un témoin négatif.
Techniques
- Plaque chauffante (40 °C)
- GR à 40 % dans leur sérum.
- Lecture valide uniquement si le témoin est négatif.
- Technique en tube
- Plus sensible.
- GR à 5 % + anti-D, incubation 15 min à 37 °C, centrifugation.
- Technique en gel + broméline
- Enzyme ↓ charge électrique des GR.
- Très sensible (supérieure au Coombs indirect).
Indications
- Transfusion sanguine.
- Examen prénuptial.
- Bilan de grossesse.
3. Autres antigènes du système Rh
- Recherche des antigènes : C, c, E, e en plus de D.
- Utilisation d’anticorps spécifiques (anti-C, anti-c, anti-E, anti-e).
- Intégrée au phénotypage Rh étendu (incluant KEL1).
- Technique : milieu gélifié.
4. Diagnostic d’un D faible
- Réalisé par test de Coombs indirect.
- Réactifs :
- Anti-D albumineux,
- Sérum témoin sans anti-D,
- Hématies O Rh+ et O Rh−,
- Sérum anti-globuline humaine.
5. Recherche des agglutinines irrégulières (RAI)
Principe
- Mise en contact du sérum du patient avec des hématies tests O de phénotypes connus.
Origine des anticorps
- Transfusions antérieures.
- Grossesses.
- Auto-immunisation.
Conséquences
- Inefficacité transfusionnelle.
- Choc transfusionnel.
Étapes
- Dépistage
- 3 hématies tests O (Coombs indirect).
- Négatif → RAI négative.
- Positif → identification.
- Identification
- ≥ 10 hématies tests O.
- Test de Coombs indirect ± technique enzymatique (papaïne).
Indications
- Avant toute transfusion chez :
- polytransfusés,
- femmes enceintes ou en âge de procréer,
- patients greffés.
6. Épreuve directe de compatibilité (Cross-match)
- Test du sérum du receveur avec les hématies du produit sanguin.
- Absence de réactivité → unité compatible.